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医学
使变性DNA复性的条件是
使变性DNA复性的条件是
admin
2019-12-31
57
问题
使变性DNA复性的条件是
选项
A、温度逐渐冷却
B、DNA不均一时易复性
C、DNA浓度高时易复性
D、DNA溶液中盐浓度高时不易复性
答案
A,C
解析
DNA的复性是指变性DNA在适当条件下,两条互补链全部或部分恢复至天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为“退火”,这一术语也用以描述杂交核酸分子的形成。DNA的复性不仅受到温度影响,还受到DNA自身特性等其他因素的影响。
(1)温度和时间:变性DNA溶液在比T
m
低25℃的温度下维持一段相当长的时间后,其吸光率会逐渐降低;将此DNA再加热,其变性曲线特征可以基本恢复到第一次变性曲线的图形,这表明复性是相当理想的。因此一般认为比T
m
低25℃左右的温度是复性的最佳条件,越低于此温度,复性速度就越慢。在很低的温度(如4℃以下)环境下,分子的热运动显著减弱,互补链结合的机会自然极大地减少。从热运动的角度考虑,维持在T
m
以下的较高温度更有利于复性。复性时温度下降必须是一个缓慢过程,若在超过T
m
的温度下迅速冷却至低温(如4℃以下),复性几乎是不可能的,因此核酸实验中经常以此方式保持DNA的变性(单链)状态,这说明降温时间太短以及温差较大均不利于复性。
(2)DNA浓度:复性的第一步是两个单链分子之间的相互作用,即“成核”。这一过程进行的速度与DNA浓度的平方呈正比,即溶液中DNA分子越多,相互碰撞结合“成核”的机会越大。
(3)DNA顺序的复杂性:简单顺序的DNA分子,如多聚(A)和多聚(U)这两种单链序列复性时,互补碱基的配对较易实现;而顺序复杂的DNA,如小牛DNA的非重复部分,一般以单拷贝形成存在于基因组中,这种复杂特定序列要实现互补,显然要比上述简单序列困难得多。
(4)溶液的离子强度对复性速度也具有影响作用,通常盐浓度较高时,复性速度较快。
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